实习报告(修改)(2700字)

来源:m.ttfanwen.com时间:2016.9.25

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学 生 实 习 报 告

实 习 名 称 认知实习

院 部 名 称 材料工程学院

专 业 材料科学与工程(视光材料与应用) 班 级 14材料科学与工程(视光材料与应用)(1)学 生 姓 名 朱荣敢

学 号 1407103034

实 习 地 点 上海、南京

指 导 教 师 李新华

实习起止时间:20xx年3月1日至20xx年3月6日

金陵科技学院教务处制

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金陵科技学院 认知实习

我眼中的视光

眼镜

外出实践,对我们大学生来说,是一个拓展视野和增强学习能力的机会。此行上海,增加了不少知识,也多了很多想法,对于视光行业也多多少少有了一些自己的认识。

怀着好奇,我走进场地,顿时被花花公子的眼镜吸引了,我看了宣传视频,给我的很深的感受。以前我感觉眼镜

是一个工具,只是可以让近

视或远视或其他一些有眼部

问题而看不清东西的人拥有

清楚的视觉。但是花花公子

却把它做成了一个艺术品。

不再简单的是一些基本的功

能,而是在实现基本功能的

同时满足了人们对美的需

求。当代人们已经不在满足

于把工具仅仅当作工具,他

们更希望能让工具变得有艺

术美感。我先看了明月光学的眼镜,那些眼镜的设计有着令人着迷的美感。具有工艺的棱角,有着现代的元素。看起来豪放

不羁,这些设计让眼镜有了自己的

灵魂。这样的眼镜偏向于一种美容

用的装饰品、奢侈品。

第一次认识到了原来眼镜的

市场是这样的庞大,眼镜销售其实

只是其中的一个部分,还有比如眼

镜盒,眼镜布,防雾喷剂这些东西

一并销售。眼镜的销售是一个庞大

的链条。这个行业的潜力是巨大

的。视光不是眼镜,还包括了很多

诸如做眼镜的磨片机等。

我还去听了讲座,虽然听的

是英文,没太听懂。但是看着那个

中文版的PPT,知道我们专业是一

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个冷门专业。然后社会对这方面的需求是很大的。对于视光这个行业我了解的还是有点少

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金陵科技学院 认知实习

的。但是我相信在以后的学习中

我可以更加了解,并更加喜欢上

这个行业。

韩国教授列出了数据。我

在网上找了一些我国的眼镜行

业的状况:目前我国戴眼镜的人

有4亿多,若以5年更新期计,

每年需要近8000万副,加上太

阳镜,特殊用镜的开发,市场十

分可观。中国眼镜行业包括各种

用途成镜、配装眼镜、角膜接触

镜、眼镜片、眼镜架、眼镜片毛坯、眼镜盒以及配套的原辅材料、设备仪器。我国已经成为世界主要的眼镜消费国和生产国,同时也是眼镜最大的出口国,是名副其实的眼镜生产与销售大国。有专家预测,20xx年中国眼镜产业收入有望突破400亿。中商情报网显示,20xx年我国眼镜成镜产量5.47亿副,同比增长0.06%:20xx年我国眼镜成镜产量6.03亿副,同比增长10.23%,截止20xx年全国共有规模以上的眼镜制造产业218家,眼镜制造行业资产总额247.12元,同比增长9.38%。在未来眼镜行业以此趋势发展,眼镜行业的前途不可限量。所以我们的工作是很好找的。这个行业的潜力是非常大的。而且这次眼镜展给我展示了一个无与伦比的美妙的世界。这个世界里有时尚和艺术,又有现代化的技术。这是美与技术的集合。我看完以后对这个行业充满了向往。

眼镜公司

第二天我们来到了此行的第二站,陆逊梯卡。

陆逊梯卡是一个以前只听说过没见过的集团。听了集团的工作人员介绍了陆逊梯卡和公司的一个项目叫One Sight (同一个视界),这个项目为很多偏远地区的儿童或老人做了视力检查,并为他们配了眼镜,让他们能够拥有和我们一样的视界。这是一个很有爱心的项目。我第一次认真站在很多有视力或眼部问题的人的角度,考虑他们的感受。在眼镜展听讲座的时候,那个韩国教授说了一句话,所有人不论贫穷还是富裕,不论是年轻还是年老,他们对清楚的视力的渴望是一样的。所以我觉得我们这个行业不简简单单是为人配眼镜这样简单,更是给了那些顾客一个清楚的世界。我觉得这就是我们行业的意义和魅力。陆逊梯卡是一个眼镜奢侈品公司。进去给了我一个非常简约的感觉。在陆逊梯卡,工作人员给我们介绍了陆逊梯卡的工作理念,我们也切实感受到了陆逊梯卡轻松活泼的工作氛围。作为一个刚刚加入视光行业的学生,不由对未来充满了希望。也希望能加入想陆逊梯卡那样优秀的集团。

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工作人员还为我们介绍了陆逊梯卡的产品,包括运动型的眼镜。我对这个专业的认识

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又一次扩大了,原来并不是一副眼镜就能解决有视力问题的人所有的需求,他们所有的时候都希望能够有清楚的视力。因为我并不佩戴眼镜,所以对于戴眼镜的需求并不能很清楚地了解。陆逊梯卡工作人员的介绍让我对这个行业,这个专业有了更多的了解。这个领域内有很大的潜力,因为毕竟亚洲的人视力问题没有达到欧美的标准,大部分人都不能或得良好的,全面的视力诊断和视力矫正,我们就是这个领域的新人,我们是可以大有作为的。这就是这个领域的魅力吧。陆逊梯卡之行让我清楚的知道了我们这个专业的魅力。

眼镜市场 滨海地区眼镜行业现状

门店现状

滨海是濒临黄海的一个小城。上世纪90年代才开始改革开放,发展属于三线诚实中等水平。

门店在商场底层。眼镜价格多处于种下水平。眼镜门店设施不全面。大多只有电脑验光仪。专业的视光门店很少,县城内只有好视力开的一家。时光也对于滨海人来说是很陌生的词汇。要是做全面的眼部检查只能去眼科医院或县院。

消费与消费群体现状

消费者很多都是中产阶级,配镜需求大多是为了矫正屈光不正,消费的人群也集中在学龄儿童与青年,对眼镜的售价大多接受100—400元。

其他类型的眼镜的销售额,最多的是太阳镜,但单价大都不高,用途也主要用于遮阳,用于饰品的很少,消费价格也保持在300元上下浮动。新型眼镜的消费有所增长。由于大部分家庭开始有私家车,偏光镜、偏光太阳镜消费有所增长。

大部分门店并没有一些新型的产品。其位置也主要其中在学校附近,主要针对中小学生学习使用的近视眼镜。

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第二篇:生医学院实习报告(修改) 19500字

东南大学

生物科学与医学工程学院

实 习 报 告

实习单位

江苏省肿瘤防治研究所 暨江苏省肿瘤医院 实 习 时 间 2009 年 07 月 10 日至 2009 年 09 月 06 日止 学 生 姓 名 张薇 学 号 11206101 指导教师(单位) 马国建 陈森青 沈宗丽 指导教师(学校) 孙剑飞

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 目录 说明…………………………………………………………3 1 前言………………………………………………………4 1.1实习背景……………………………………………………4 1.2实习环境……………………………………………………4 2 实习内容………………………………………………5-18 2.1实习过程…………………………………………………………5 2.2实习内容………………………………………………………5-18 3 总结……………………………………………………19-22 3.1实习小结………………………………………………………19 3.2实习体会………………………………………………………20-22 4 附录……………………………………………………23-31 附录1(染色体分组方法)………………………………………23 附录2(正常人体染色体分析结果)…………………………24-29附录3(卵巢癌病人染色体核型分析数据)…………………30-31 谢辞…………………………………………………………32 学生实习鉴定………………………………………………33 实习生评价表………………………………………………34 学校评语……………………………………………………35

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 说 明 1. 实习结束之后,每位学生都必须认真撰写《实习报告》。通过撰写实习报告,系统地回顾和总结实习的全过程,将实践性教学的感性认识升华到一定的理论高度,从而提高实习教学效果。实习报告的质量反映了实习的质量,它是实习成绩评定的主要依据之一。没有在规定时间前递交实习报告者将不能参加实习成绩评定。 2. 实习报告要求条理清晰,内容详尽,数据准确。 3. 实习报告包含“学生实习鉴定”表,由实习单位填写。中英文2个版本任选一份填写即可。 4. “前言”部分。 “实习背景”简介实习目的、学院有关实习的要求、通过何种方式到此单位实习、实习起止时间等内容;“实习环境”包括实习单位全称、地址、实习单位性质、规模、简介、所含部门、部门主要工作等内容。 5. “实习内容”部分。属报告的主要部分。“实习过程”概述实习各阶段所从事的主要工作等;“实习内容”选择某个阶段的工作进行详细描述。 6. “总结”部分。“实习体会”包括本次实习的收获、对以后学习工作的看法等。 7. “谢辞”部分。主要指对实习单位、实习单位指导教师,以及合作者的感谢。 8. “学校评语”由学院实习负责教师统一填写。

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 1 前言 1.1 实习背景 应院系对06级学生的暑期实习要求,本着提高个人处理工作事宜和人际关系能力的想法,经由江苏省肿瘤医院工作人员李玫老师的引荐,本人于20xx年7月10日至09月06日在江苏省肿瘤医院进行了为期八周的暑期实习。 1.2 实习环境 江苏省肿瘤防治研究所暨江苏省肿瘤医院,前身系19xx年建院的江苏医院。19xx年江苏医院整体搬迁盱眙县后,原址由南京医学院第一附属医院接管创建肿瘤科。19xx年12月正式成立江苏省肿瘤防治研究所,19xx年增挂江苏省肿瘤医院牌子。该院是省内惟一的省属肿瘤专科三级甲等医院,是全省恶性肿瘤防、治、研、教技术指导中心。 医院拥有固定资产1.4亿元。根据省级肿瘤专科医院特点,先后引进用于临床诊断、治疗的全身多排螺旋CT、E-CT、MRI、DSA、CR医学影像诊断系统、医用高能电子直线加速器、后装治疗机、钴治疗机、多叶光栏(MLC)、三维TPS、高能超声聚焦刀、冷冻治疗系统和热疗系统等;用于基础实验研究的流式细胞仪、变性高效液相色谱仪、多规格基因扩增仪包括适时定量扩增仪、大型液氮罐沉水系统等国内外先进的大型仪器设备。这些设备的应用大大提高了恶性肿瘤的诊断、治疗和科研水平。 江苏省肿瘤医院设置职能部门20个,临床诊疗科室18个,基础医学研究室5个。肿瘤诊治学科齐全,肿瘤放疗、化疗、肿瘤普通外科、肿瘤胸外科四大学科均为省级临床重点专科。其中放疗科为“135工程”重点学科,是江苏省放射治疗中心。医院作为国家药物临床试验机构之一,在肿瘤药物临床试验方面有一定优势,为近百余种新药进行了临床研究。 研究高层次拓展,开展了具有高科技水平的肿瘤分子生物学和癌基因研究。《基因芯片的开发和应用研究》参与国家863攻关项目。《江苏省消化道肿瘤的病因学研究》获日本文部省项目资助,《遗传性大肠癌的分子生物学研究》获国家留学基金管理委员会和德国学术交流中心资助。开展的肿瘤遗传性突变、体细胞突变的分析和基因诊断在全国同类研究中处于前列。 分子生物学研究室拥有国内最大肿瘤标本库、DNA库和血清库。肿瘤遗传与分子生物学中心实验室现阶段研究项目主要针对肿瘤病人抑癌基因的突变及遗传易感性分析,研究基因包括MLH1、MSH2、APC、MYH、BRCA1、BRCA2 及MTHFR等。拥用省内最大的肿瘤标本库。配有流式细胞器、DNA序列分析仪、变性高效液相色谱仪、凝胶成像系统等仪器设备。 本次实习主要是在分子生物学研究室进行,对该实验室的研究方向以及一些基本的实验操作进行了系统学习。

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 2 实习内容 2.1 实习过程 20xx年6月16日提交实习申请; 20xx年7月10日人事处报告; 20xx年7月13日—7月20日:分子生物学实验室的参观了解,文献查阅,流式细胞术检测实验的见习,参与了医院的早会。(指导老师:陈森青、沈宗丽、吴晓柳、戴立玲); 20xx年7月27日—9月6日:综合实验 (第一阶段:细胞水平7月27日——8月12日)老师讲述肿瘤遗传学分子生物学中心实验室以及遗传学研究室的主要研究内容、技术平台,对于该科室的研究有了整体的了解;重点是核型分析实验的实际操作;实验期间兼有文献翻译等等内容。(指导老师:马国建) (第二阶段:分子水平8月13日-9月6日)试剂盒提取实验、DNA甲基化实验、以及高压液相色谱分析仪的使用学习。(指导老师:马国建、李金田、张元颖)。 2.2 实习内容

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本实验室主要是进行细胞水平的研究和分子水平的研究。其中分子水平的研究主要是对于细胞形态进行的组织学研究,包括可靠的诊断学研究,病理学和影像学的研究,所采用的方法主要是荧光原位杂交技术。分子水平的研究主要是在基因的,是更加先进的研究方法。而本科室的主要研究内容有:基因表达、基因遗传多态性以及表遗传学(甲基化表达)科室的技术平台有:PCR、遗传多态性(高压液相色谱分析)、测序分析以及MSP。

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1) 实验原理:

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 除电源外,流式细胞仪主要由四部分组成:流动室和液流系统;激光源和光学系统;光电管和检测系统;计算机和分析系统。其中流动室是仪器的核心部件。这四大部件共同完成了信号的产生、转换和传输的任务。 信号的产生、转换和传输在压力作用下,鞘液管中的鞘液被持续不断地压入流动室,形成一股稳定地连续的液流,保证了样本液稳定地处于鞘液液流的轴线上,并以单个细胞形式直线通过激光照射区。激光照射区又称测量区,是指液流与激光束垂直相交的点。当细胞携带荧光素标记物通过激光照射区时,产生代表细胞内部不同物质、不同波长的荧光信号,这些信号以细胞为中心,向空间360。立体角发射,产生散射光和荧光信号。在免疫分析中常要同时探测两种以上波长的荧光信号,就采用二向色性反射镜,或二向色性分光器,来有效地将各种荧光分开。 经荧光染色的细胞受到适合的光激发后产生的荧光是通过光电转换器转变成电信号而进行测量的。最常用的光电转换器是光电倍增管(PMT)。从PMT输出的电信号需要经过放大后才能输入分析仪器。流式细胞仪中一般备有两类放大器:线性放大器和对数放大器。在免疫学测量中常使用对数放大器。 放大后的电信号被传送到计算机,再经模一数转换器传输到微机处理器形成数据文件,保存在计算机上。保存在计算机上的数据可在脱机后再进行数据处理和分析。 流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的。由喷嘴射出的液流柱在电信号作用下发生振动,断裂形成均匀的小液滴。根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选,而后由充电电路对选定细胞液滴充电,带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转,落入收集器中。使用不同孔径的喷孔及改变液流速度,可能会改变分选效果。从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间。精确测定延迟时间是决定分选质量的关键,可根据具体要求进行适当调整。 数据的显示和分析数据处理主要包括数据的显示和分析。单参数直方图是使用最多的图形显示形式,既可用于定性分析,又可用于定量分析。单参数直方图是由x、Y二方向组成的二维平面图。横座标x是所测的荧光或散射光的强度,用“道数”(Channel No.)来表示。选择的放大器类型不同,标度不同。纵座标Y通常表示被测细胞的绝对数目。正常情况下,数据分析得到的图形为具有一个或若干个峰的曲线图。对曲线图的解释应该具体问题具体分析。 除直方图外,数据显示方式还包括二维点图、二维等高图、假三维图和列表模式等。二维点图也是比较常用的数据显示类型。它显示两个独立参数与细胞相对数之间的关系,也是二维平面图,横纵坐标可以根据自己选定的被测参数自行决定,点的位置表明了细胞和颗粒具有的二个被测参数的数值。二维点图所提供的信息量要大于单参数直方图。

线

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东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 2)实验目的: 在本实验室进行流式细胞术检测的目的是通过对于免疫细胞的常规检测,对肿瘤病人各个化疗阶段的情况进行检测对比,从而对于其病情进行评价以确定下一阶段的治疗方案。采用多参数流式细胞术,对PB中淋巴细胞比例,及淋巴细胞中T、B、NK细胞的比例,及T细胞亚群进行检测。这方面的临床应用有:原发性或继发性免疫缺陷病、自身免疫性疾病、淋巴细胞增殖病、肿瘤疗效观察与预后判断、移植免疫检测等。 3)实验步骤: 1、取病人血液作为样本。经过胰酶等处理。标本如果是属于淋巴细胞等血细胞、骨髓细胞或白血病细胞系或类淋巴细胞系,要经Ficoll分离,作单细胞分离处理,但若为实体组织或贴壁生长的上皮成纤维样细胞,需采用酶消化法(胰蛋白酶、胶原酶等),化学法(EDTA、EGTA和柠檬酸盐)消化分散液或洗液最好用无钙、镁PBS,柠檬酸盐的浓度为40μmol/L,并同时采用机械分散法。 2、本次检测采用的显示方式是二维点图:

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全血流式术XCF-FCM图

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告

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对于消化道癌、肝癌、肺癌来说,CD8+的会超过常人,其他数值均低于正常值。 流式细胞术在肿瘤学的作用很广。对于各种肿瘤有其对应的方法。比如对DNA含量进行检测,对DNA倍体和S期比例可以对于一些早期癌症的治疗进行指导。 本次实验通过对于几种不同的癌症病人的免疫常规检测,对他们的癌症化疗效果作出了评价,并且对于下一步的化疗进行了指导。 A1、器材: 超净台、培养箱、离心机、酒精灯、冰盘、培养瓶、吸管、移液管、橡皮盖及玻片。 消毒过程:培养瓶、吸管、移液管(泡酸洗净然后高压处理) 橡皮制品(肥皂粉洗净后高压) 玻片(先泡酸然后反复冲洗,最后使用无菌蒸馏水) 2、试剂: 1640培养液(已配制好) 小牛血清(在无菌条件下由小牛颈动脉采血后分离血清,置于56?C水浴中30min灭活,置于4?C冰箱中保存) PHA(植物血凝素;淋巴细胞只有在PHA的刺激下才能进入有丝分裂,其中的粘多糖成分刺激分裂,而蛋白质则起凝集作用) 秋水仙素(本实验选用秋水仙碱) 蒸馏水 低渗液(0.075M KCl溶液) 3、制片过程: 主要分为三步:培养(短期)——制片——观察(经验+经历)对23对染色体进行综述 实验中心思想:无菌 a、消毒灭菌无菌: 通风橱、消毒保存一个星期 b、手法问题: 枪头、玻璃器皿过火灭菌;37℃培养(短期培养无需CO2液氧)每24h摇匀一次,观察上层培养液是否清亮(未粉红渐渐转为黄色); 培养前2小时,加秋水仙碱使其抑制在染色体中期。

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 过程概述:低渗处理——固定——滴片——过火分散——染色——油镜分析 B 7月21日~ 7月26日——消毒处理溶液配制(实验准备阶段) 1、粗制重铬酸钾加上粗制的硫酸,将玻璃器皿捆绑牢固,泡酸48h。 2、配制酒精:将95%的酒精配制成75%的酒精。 3、超净台清洗工作:将超净台用皂粉水里外清洗一遍后用净水冲干,由内到外擦拭酒精,再打开紫外灯。 4、气息橡皮盖:皂粉水反复洗净,放入恒温箱烘干。 5、基本操作的练习:火焰上方盖瓶塞,注意点:瓶子倾斜45度。 6、工作液的配置:1、PH=6.8 S?rensen缓冲液(KH2PO4 1.15g + Na2HPO4·12H2O 2.95g溶于250ml蒸馏水中)2、PH=6.4 S?rensen缓冲液(KH2PO4 1.58g + Na2HPO4·12H2O 1.79g溶于250ml蒸馏水中)3、低渗液(1.4g KCl加水至250ml) 姬母萨染液(Giemsa;原液配制——Giemsa粉末1g+甘油即丙三醇66ml+甲醇66ml;将Giemsa粉剂放入乳钵中,边滴加甲醇边充分研磨,充分溶解后再加入甘油,混合摇匀,用有色玻璃瓶保存,室温放置一周后使用。) 7、高压灭菌 8、紫外分光光度计说明书翻译和学习。 9、玻片清洗冷藏:先将玻片一片一片地放入酸缸中浸泡48h后取出冲洗干净并且烘干后一片一片地泡入酒精中过夜。将泡于酒精中一片一片取出在自来水下冲洗至表面乌夜啼残留为标准。冲洗完毕后再用蒸馏水冲洗一遍后放入盛有蒸馏水的烧杯中放入冰箱制作冰片。 10、在超净台下配制2mg/ml秋水仙碱和4mg/ml的PHA放入冰箱中冷冻备用。 11、染色体分组方法的详细学习(方法记录见 7月27日~8月6日——正式实验过程 Step1: 于门诊部取男性血样3ml,由静脉采血3ml,注入含有肝素(100单位/ml)的抗凝管内混匀,分成6份,每份吸取0.4ml。 取 1)小牛血清 15%×5ml/份×7份=5.25ml 2)1640培养液 85%×5ml/份×7份=29.75ml 3)4mg/ml的PHA 25ug/ml×5ml/份×7份÷4000ug/ml=0.219ml. 三者混合后,分别取5ml与0.4ml的血液混合后分装六瓶,盖瓶塞后置于37℃培养箱培养。 Step 2: 保证细胞培养的流水式电热恒温培养箱的温度恒为37℃。每隔24h取出分装瓶观察上层培养液,若从粉红渐成微黄,且清亮;下层细胞株上无异常菌落,则说明细胞生长状况良好。轻轻混匀,使上下层混合,继续培养。 Step 3: 在70h后加秋水仙碱,0.6ug/ml×5ml=3ug,原液秋水仙碱是2mg/ml,则每瓶添加1.5ul,

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 为了保证加入的量足够,将枪调至1.7ul。(此时无菌要求不如前面的那么严格,还有两个小时培养终止,细胞生长已过对数期。) Step 4: 1、将培养瓶中的液体全部转至10ml离心管中,离心沉淀血细胞(3000rpm 5min) 2、配制固定液:甲醇120ml 冰醋酸40ml 3、在离心管中加入0.075M KCl 直至10ml,静置15min ,离心(2200rpm 5min)——因为细胞已经融入KCl中,不必将所有的均离心下来,所以转速略低于前面的转速。 4、去上清,留下底部的两层沉淀。加固定液,每管2ml预固定,立即混匀。后两管并未一管,加固定液至10ml后混匀,室温下静置30min。2500rpm离心5min。 5、弃上清,加入固定液至10ml,固定20min,2200rpm离心5min。 6、弃上清,开始滴片(从冰箱中取出预先制好的冰片置于冰盘上,滴两滴新鲜固定液后混匀,将混合液滴到冰片上,经火烘烤,注意烘烤速度要快,因为玻片上的甲醇是可燃液体,而且烘烤时间过长会考焦。)斜至晾干。 7、PH=6.8 S?rensen缓冲液与Giemsa染液1:10新鲜配制,待玻片晾干后用染料染色,悬空放置一段时间。 8、蒸馏水冲去多余的染料,10倍镜下找到分裂相,换用100倍油镜仔细观察。 9、进行染色体分析,分析结果如 本次试验分裂相不多,效果不是很理想。所以改变了一些参数重新进行实验。 改变的条件有: ①小牛血清的量从15%改成20%,PHA改为30ug/ml,血样改成0.5ml每份。 ②秋水仙碱改为0.8ug/ml。 ③离心沉淀的时候2000rpm 5min。 ④其他离心步骤均改为1200rpm 8min。 改善后得到的分裂相比较多。细胞分散效果也比较好。失误之处是低渗的时间不够导致细胞破裂的效果不够理想。 瘤组织制备染色体标本的成功率约为50%,以人肿瘤细胞株为对象制备染色体标本: 短期培养: 1 瘤组织在5mL生长培养基中被剁碎 2 置37℃水浴中温育约21小时 3 加入0.5mL 0.02%的秋水仙胺,于37℃再次温育3小时。 4 进一步使组织剁碎弄细成悬液。 5 将已经剁碎的组织和培养基转入离心管,使在重力的作用下,大的组织碎片沉降下来。 6 吸出上浮的细胞悬液。 7 (同皮肤培养)①吸出培养基,用5mL的Dulbecco A 液冲洗;② 加2mL预热的胰蛋白酶——Versene液;③立即吸去胰蛋白酶——Versene,只留下约0.5mL在皿内。④在37℃大约温育10-15mins;⑤看到细胞从盖玻片剥离后,加入5mL生长培养基,以吸管吹吸使细胞悬浮。

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 2009-8-10 (东大样本 Vo1228) 1、 离心沉淀; 2、 在两管中分别加入4uL的2mg/mL的秋水仙碱,静置两小时; 3、 离心沉淀(2000rpm×5min); 4、 加入0.075M KCl,37℃条件下放置20min后再离心(1000rpm×8min); 5、 加入固定液平衡至10mL,静置30min,离心(1000rpm×8min); 6、 加入固定液平衡至10mL,静置20min,离心(1000rpm×8min)。 实验结果见附录3

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总体了解:

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┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 实验学习(QlAamp DNA Mini handbook的翻译,学习了Blood Mini 和Tissue Mini两种试剂盒提取实验): 预备工作: 1、样品平衡至室温(15~25℃)。 2、准备56℃和70℃两个水浴锅。 3、Buffer AE或者蒸馏水平衡至室温。 4、准备好Buffer AW2和Buffer AW1。 5、如果在Buffer ATL或者Buffer AT中有沉淀生成,则需要在56℃下进行孵育。 步骤: 实验材料选取: 肝癌外周血 实验前准备: 1、 取出13份病人血样,在室温下冻融一个小时,使其平衡到室温; 2、 水浴锅调至56℃; 3、 Buffer AE(或者蒸馏水)平衡至室温; 4、 保证Buffer AW1和Buffer AW2以及胰酶按照规定准备好; 5、 若Buffer AL中有沉淀生成,则需要放入56℃水浴中孵育。 实验步骤: 1、分别吸取10uL的胰酶,加到1.5mL的离心管中;(13组) 2、 在每支离心管中分别加入200uL的样品; 3、 在每支离心管中加入200uL的Buffer AL,振荡15s来混匀; 4、56℃下孵育10min; 5、简单离心以使离心管盖子上附着的液滴滴下; 6、每管中加入200uL的无水乙醇 实验记录:

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东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告

实验结果及分析:

注:从左到右依次为H67~H79,以及24kbps的MARKER

2 DNA 甲基化实验

背景:

DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明,DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关,抑癌基因启动子CpG岛的高甲基化可引起抑癌基因表达沉默, 细胞出现无节制生长,导致肿瘤的发生[1]。目前,甲基化特异性PCR(methylation2specific PCR, MS2PCR)是研究DNA甲基化最为常用且准确度较高的方法之一,而理想的引物设计则是其成功的关键因素之一。国外互联网上有1个提供免费在线引物设计程序“MethPrimer”,它能够预测CpG岛,根据实验者要求设计硫化测序PCR ( bisulfate2sequencing PCR, BSP)和甲基化特异性PCR (methylation2specific PCR,MSP)引物。

原理:

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“U”,通过随后的PCR,将“U”转化为“T”,但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的DNA的“C”发生上述转化,因此,根据经亚硫酸氢盐处理的DNA模板设计引物时,先输入感兴趣的DNA序列,程序将会显示2种序列:一种是输入的源DNA 序列;另一种是硫化处理后的DNA序列,除了CpG岛上的5甲基胞嘧啶(5mC)之外,所有非甲基化的“C”都转换成了“T”,根据转化后的序列设计引物,进行BSP和MSP。 对比此二图可以看出,未甲基化的DNA的序列中的C经过璜化脱氨基等过程变成了U,而甲基化以后的C则不再改变。所以,处理后的DNA序列根据原来是否被甲基化说出现的结果是不同的。并且,原本的互补的DNA序列在C转化之后将不再互补。在MSP实验中,用到的引物根据其化学诱导的不同,可以设计成对于重亚硫酸盐敏感,未甲基化的链,或者是对于重亚硫酸盐不敏感但是甲基化的链。 实验需要额外准备的配备: 设备: a 37℃和50℃的水浴; b 离心机(to 12000×g) c 带有螺旋盖的离心管,规格:1.5-2.0ml d PH=0-6 3indicator/strip 或者PH=4-7 1indicator/strip的PH试纸或者是提供一台PH测试仪。 试剂: a NaOH 小球(pellets) b 70%,90%和100% 的EtOH; c β-mercaptoethanol(β-巯基乙醇) d TE Buffer(10mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, PH=7.5) 实验方法:

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东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 100碱基对梯度(第1行)。 1.0ug DNA , 0.1ug DNA, 0.01ug DNA, 0.001ug DNA,未添加DNA修饰试剂IV(第2~5行)。 1.0ug DNA , 0.1ug DNA, 0.01ug DNA, 0.001ug DNA,添加DNA修饰试剂IV(第6~9行)。 Step 1:溶液准备 1、3M NaOH 原液配制(现配现用);1g干燥的NaOH固体加8.3mL的水混合。 2、20mM NaOH/90%的酒精。1mL的溶液:900uL的100%酒精,93.4uL水,以及6.6uL的3M NaOH。 3、溶解溶液I(现配现用,开启瓶子之前使其至室温):0.227g DNA修饰I,0.571mL水。振荡充分混合。使用大约20uL的3M NaOH 将PH值平衡到5.0。 4、溶解溶液II(开启瓶子之前使其至室温):1uLβ-巯基乙醇加上20mL去离子水,然后取750uL加入1.35gDNA修饰II。用于每一份样品的修饰,放置于箔纸包裹的容器中,黑暗下2-8℃保存,有效期6周。 Step 2:DNA修饰步骤 1、在1.5-2.0mL的螺旋盖离心管中:在1.0ugDNA/100uL水,加入7.0uL的3M NaOH,混合。(注意:如果样品中含有的DNA不足1.0ug,则先在其中加入2uL的DNA修饰溶液IV,然后加水使总体积至100uL,然后加入7.0uL的3M NaOH混合) 2、50℃水浴10min孵育DNA 3、加入550uL新鲜配制的DNA修饰溶液I振荡混合。 4、50℃水浴孵育4-16个小时 Step 3:首次除盐 1、强力振荡悬浮DNA修饰III。用1mL塑料移液管(tip 10×),吹打悬浮液从而保证剩下的凝块也被打散。 2、在试管的DNA溶液中加入5uL悬浮好的DNA修饰试剂Ⅲ。 3、再加750uL DNA修饰溶液Ⅱ,简单混合。 4、室温孵育5-10分钟。 5、5000×g旋转10s使DNA溶剂Ⅲ形成小球,弃上清。 6、加入1.0mL 70%酒精,振荡,5000×g离心10s弃上清。进行3次。 7、弃上清以后,高速离心2min,吸液管吸去上清。

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(这个是一次实验的结果,由于温度未设置正确,M组的条带未显示出来) 后经过调整得到以下结果(条件:ddH2O 16.8 buffer 2.5 dNTP 2 PF 0.5 PR 0.5 Tq 0.2 DNA 2.5 M 57℃ U 53℃)

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实验中可能遇到的各种问题以及其解决方式: 1 泳道都没有条带产生 Potential Problem1: PCR扩增未开始 Recommendation:

a 保证PCR所需的内容物全部加入了反应管中; b 保证时间和温度设置正确;

c 若使用AmpliTaq Gold 进行hot start PCR,证实初始的变性/激活过程中的温度是95℃; d 其他所有的hot start 步骤均需保证试剂使用正确; e 保证PCR聚合酶的活性。 Potential Problem2:

实验用DNA样品在化学修饰之前已经降解 Recommendation:

再次纯化基因组DNA重做化学修饰。从Chemicon得到的甲基化的DNA(未修饰)可以作为一个现成的对照物。 Potential Problem3: DNA样品在修饰后降解 Recommendation:

如果化学修饰的实验DNA样品在进行PCR之前-20℃下保存超过了两个月,则需用新的基因组DNA样品重做化学修饰。

2 只有用W引物系操作的泳道中有条带出现 Potential Problem1:

实验所用的DNA样品化学修饰不成功 Recommendation:

a DNA Modification Ⅰ和3M NaOH原液必须是现配现用的。

b NaHSO3只修饰单链的DNA,双链的DNA必须先用200mM NaOH变性。如果在变性之前插入限制消化的步骤的话,切口需要小心地定位于延伸模板链之外。(CpG WIZTM MSP

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┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 Primer Kits无需此步骤。) Potential Problem2: DNA没有被修复 Recommendation: a 保证在第一次离心含有Reagent Ⅲ的悬浮物时出现了一个小白球,大约为1mm×2mm大小。若没有就加入更多的Reagent Ⅲ,振荡,重新温育10min后重新离心; b 洗提DNA之间去除所有的酒精; c 确保洗提前小球就充分悬浮。 Potential Problem3: 修饰过程中DNA降解 Recommendation: PH=5时孵育DNA将会不可避免地引起一些损害。50℃下Reagent I孵育超过16小时可能引起一些甲基化的C转变成T。 Potential Problem4: 一些DNA序列形成杜绝化学修饰的结构,一些DNA样品部分或者随机地甲基化,在修饰之后,于推荐的PCR条件下,不能与MSP引物结合。 Recommendation: 这些可能性通过对修饰后的DNA进行克隆、扩增和测序来探究。 Potential Problem5: 残余的Reagent III悬浮物随DNA转入的PCR管 Recommendation: 先离心! 3、除了U或者M引物系的扩增引物之外,W引物系在所有的实验样品中均可产生扩增引物。 Potential Problem:化学修饰不充分。 Recommendation:只要U或者M引物系产生产物,将不危害实验的有效性。 4、U和M引物系都在某些DNA样品中都可以产生产物 Potential Problem:样品不均一。 Recommendation:DNA样品可能从不纯的原始细胞型中提取,包含有甲基化及未甲基化DNA。 5、U或者M引物系在所有的样品中都有条带产生,包括"无DNA"的对照组。 Potential Problem:PCR试剂沾染了扩增产物。 Recommendation: a 使用新鲜的PCR内容物 b 扩增前后的液体分配使用分开的吸液装置 c 设置扩增前后过程中的专用工作区 d 一直使用抵抗浮质的移液管

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英文版本翻译成为中文版本,并且经由马老师进行了一定的修改以及指导。

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 3 总结 3.1 实习总结 1、流式细胞术总结: 流式细胞术最早的临床应用就是在肿瘤学方面,通过对DNA含量的检测,不仅可对恶性肿瘤DNA含量进行分析,还可根据化疗过程中肿瘤DNA分布直方图的变化去评估疗效,了解细胞动力学变化,对肿瘤化疗具有重要的意义。 FCM通过荧光抗原抗体检测技术对细胞表面抗原分析,进行细胞分类和亚群分析。这一技术对于人体细胞免疫功能的评估以及各种血液病及肿瘤的诊断和治疗有重要作用。临床医师可以根据细胞周期各时相的分布情况,依据化疗药物对细胞动力学的干扰理论,设计最佳的治疗方案,从DNA直方图直接地看到瘤细胞的杀伤变化,及时选用有效的药物,对瘤细胞达到最大的杀伤效果。流式细胞术是一种应用范围极广、灵活性很强、技术含量较高、具有众多开发潜能、富有挑战性的技术,需要掌握很多交叉学科知识,我们的宗旨是将这项高新技术灵活运用于临床、科研等领域,报告最科学、最真实的客观数据,以服务于全社会。流式细胞术检测范围是:在细胞结构方面——细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、RNA含量、蛋白质含量。在细胞功能方面——特异性抗原(细胞表面/胞浆/核)、细胞内细胞因子、细胞活性、酶活性、激素结合位点、细胞受体。 2、第一期实验:核型分析(细胞水平的基础实验,研究亚分子水平的形态学变化)总结 核型分析已经向自动化发展,但是从加秋水仙素到染色这个过程仍然需要采用手工操作。虽然现在可以用探针(根据基因序列来确定)来标记各染色体从而用仪器自动分组,但是其价格昂贵且实用价值不高(紧紧能够将染色体分成七个组而已),且初学过程有必要对于人体的46条染色体有一个感性的认识,所以练习了染色体的分组,基本掌握了这个分析方法。 在看过正常人体染色体情况以后用分析了一位肿瘤(卵巢癌)病人的染色体情况,二者对比,得出明显差异。从而实际地看到了人体癌变的一个本质上的变化过程,受益匪浅。 到目前来说,和PCR技术相比,核型分析的结果更加受到国家以及科学界的承认,是一个从事这方面工作和学习的人必需要掌握的一个必要的知识。 3、第二期实验:MSP(分之水平的基础实验) 原来认为的肿瘤的产生是由基因本身的遗传信息畸变而导致的,后来研究发现基因修饰的改变也会引起肿瘤的生成,从而出现了当前越来越受到生物医学方面重视的表遗传学。本实验就是在表遗传学的水平来进行的。

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┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 在实习的最后一周里面我接触到了许多人。这时候交流增多了发现跟他们交流我可以得到许多知识和启示。值得一提的是,最后一周的实习里,我才知道张元颖老师是我们学校的,也是我们系毕业的研究生,对于我即将面对的导师选择的问题,以及以后的读研进修方面,提供了很多建议。也让我对于我们系的方向前景以及导师等等都有了很好的了解。 如果我能够利用空闲的时间多去交流的话,我所获得的一定会更多。这是我在以后的工作和生活之中需要重视起来的。 4、工作态度方面: 要善于沟通,跟别人的沟通过程中,总是能够或多或少地有所得的。 不论将来身处哪个行业,热情和信心都是不可或缺的。 勤奋无论在哪里都是最最重要的,不管什么行业,你的老板都喜欢勤奋的人,就算你自己是老板,也应该做一个勤奋的老板。 将自己的工作和生活安排得有条不紊才能产生效率。做什么事情都要有所准备。机会是给有准备的人的。 5、人生规划方面: 本次实习中,我意识到自己的不足之处在有:专业知识基础不牢固、理论与实践结合不紧密、做事情不够冷静容易慌慌张张、社会经验缺乏等等。这些将成为我以后四年大学生活的努力方向,我要力争尽快提升自己各方面能力和素质,以新的面貌来迎接生活中即将遇到的新的机遇和挑战。 短短两个月的实习一晃而过,我获得了许多终身受用的东西,我也将牢牢记住这一次经历。实习拉近了社会的距离,让我跳出了自己的“围墙”。说得大一点,我的人生观价值观都有所改变! 社会的竞争要比学校里面的竞争来得残酷得多。江苏省肿瘤医院是一个三甲级的大医院,里面的竞争更是可想而知。李玫老师曾经对我说过,科研科相对而言比其他科室要轻松许多了,可是我仍旧感受到了那种压力,那种人人争上的劲头,这确实是一个激流勇进不进则退的社会。我们没有选择权。其实生活在这样的社会,我们是幸运的,虽然会很辛苦,但是我们会变得更好,做更加强大的人。 同时,从本次实习中,我也对本专业的工作前景有了更加深入的了解,更加明确了自己的目标,也有了初步的人生规划。 1、学好英语,有空学习一些其他语言。英语在科研中的重要性是有目共睹的。学习语言并不是外语系学生的专职。交流很重要,语言的隔阂是难以排除的。 2、处理好人际关系,多联系联系自己认识的同学和朋友,也多参加一些课外活动和社会交流,多认识一些人,构建一个人际关系网,让自己不论遇到什么情况,总能够找到可

┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 以给予帮助或者是协助的人。 3、将自己所学的知识多和实践联系起来,明确自己想要干的事情。 4、做好每件小事。只求每天提高一点。正如詹妮弗安妮斯顿所说的:不要在计划太多,而是做好选择。每件事,我都要尽量选对方向。发现不对是能够悬崖勒马。 5、多利用假期出去闯荡闯荡,提升社会经验。

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东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告

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┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 装 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 订 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 线 ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ ┊ 东南大学 生物科学与医学工程学院 实习报告 谢辞 感谢江苏省肿瘤医院给本人提供了一个三甲级的实习环境。 感谢李玫老师的引荐。 感谢马国建老师、陈森青老师的耐心教导,特别是感谢马老师所强调的许多实验方面的“关键词”。 感谢沈宗丽老师、吴晓柳老师以及戴立玲老师的细心讲述以及对于实习所提供的鼓励和建议。 感谢其他科室的老师跟我说过一些金玉良言。 感谢李金田老师对实验的指导。 感谢张元颖老师兼学姐的指导,以及对于我将来工作进修等方面提供的建议。 感谢在最后一周实验中给予帮助的王师兄。

学生实习鉴定

兹证明,东南大学生物科学与医学工程学院 06 级本科生 张薇 同学(学号:11206101),从 2009 年 07 月 13 日至 2009 年 09 月 06 日在 江苏省肿瘤防治研究所暨江苏省肿瘤医院 公司的 科研科 部门 分子生物学研究 组进行实习。实习期间,该同学主要从事了以下几个方面的工作:

1、流式细胞术检测实验;

2、核型分析实验;

3、试剂盒提取实验;

4、DNA甲基化修饰实验;

5、PCR实验;

6、文献翻译等。

公司是否同意该同学结束实习:

建议实习成绩: (以优、良、中、及格、不及格五级分计)

公司指导教师(签名): 公司人事部门负责人(签名):

职称或职务: 职务:

部门: 部门:

联系电话: 联系电话:

E-mail: E-mail:

日期: 日期:

公章(若公司不方便盖章,可免公章)

实 习 生 评 价 表

实习时间: 2009 年07 月 10 日~ 2009 年 09 月 06 日

实习学生姓名:

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东南大学生物科学与医学工程学院

学校评语

建议实习成绩:

指导教师(签字):

评定时间: 年 月 日

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